Комбінований швидкий тест для виявлення гепатиту В, гепатиту С, ВІЛ 1/2, сифілісу

1. ПРИЗНАЧЕННЯ

Швидкий тест касета для виявлення гепатиту В, гепатиту С, ВІЛ 1/2, сифілісу  (цільна кров/сироватка/плазма) це швидкий імунохроматографічний аналіз для якісного виявлення антитіл до HCV, антитіл до вірусу ВІЛ1/2, HBsAg та/або антитіл до Treponema Pallidum у зразках цільної крові, сироватки або плазми людини. Він призначений для професійного використання як допоміжний засіб у діагностиці інфекцій HCV, ВІЛ, HBV та/або сифілісу. Цей аналіз дає лише попередній результат, і всі позитивні зразки повинні бути підтверджені іншими кваліфікованими аналізами.

1. ПЕРЕЛІК

ВІЛ є етіологічним збудником синдрому набутого імунодефіциту (СНІД). Віріон оточений ліпідною оболонкою, яка походить від мембрани клітини-хазяїна. На оболонці міститься кілька вірусних глікопротеїнів. Кожен вірус містить два дубліката позитивної геномної РНК. ВІЛ-1 виділено від пацієнтів зі СНІДом та комплексом, пов’язаним зі СНІДом, а також у здорових людей з високим потенційним ризиком розвитку СНІДу. ВІЛ-2 було виділено від хворих на СНІД в Західній Африці та від серопозитивних безсимптомних осіб. І ВІЛ-1, і ВІЛ-2 викликають імунну відповідь. Виявлення антитіл до ВІЛ у сироватці або плазмі є найефективнішим та найпоширенішим способом визначення того, чи була особа піддана ВІЛ, і скринінгу крові та продуктів крові на ВІЛ. Незважаючи на відмінності в їх біологічних характеристиках, серологічній активності та послідовностях геному, ВІЛ-1 і ВІЛ-2 демонструють сильну антигенну перехресну реактивність. Більшість ВІЛ-2-позитивних сироваток можна ідентифікувати за допомогою серологічних тестів на основі ВІЛ-1. Вірусний гепатит – це системне захворювання, яке в основному вражає печінку. Більшість випадків гострого вірусного гепатиту викликається вірусом гепатиту A, вірусу гепатиту B (HBV) або вірусу гепатиту C. Комплексний антиген, що знаходиться на поверхні HBV, називається HBsAg. Наявність HBsAg в сироватці або плазмі крові є ознакою активної інфекції гепатиту В, гострого або хронічного. При типовій інфекції гепатиту B HBsAg буде виявлено за 2-4 тижні до того, як рівень АЛТ стане аномальним, і за 3-5 тижнів до розвитку симптомів або жовтяниці. HBsAg має чотири основних підтипи: adw, ayw, adr і ayr. Через антигенну неоднорідність детермінанту існує 10 основних серотипів вірусу гепатиту B. Вірус гепатиту C (HCV) — це невеликий одноланцюговий РНК-вірус із оболонкою з позитивним сенсом. Антитіла до HCV можна виявити в культурі клітин або візуалізувати за допомогою електронного мікроскопа. Клонування вірусного геному дало можливість розвиватися серологічним аналізам з використанням рекомбінантних антигенів. У порівнянні з ІФА HCV першого покоління з використанням одного рекомбінантного антигену, в нових серологічних тестах було додано кілька антигенів із використанням рекомбінантного білка та/або синтетичних пептидів щоб уникнути неспецифічної перехресної реактивності та підвищити чутливість тестів на антитіла до HCV. 

Treponema pallidum (TP) є бактерією спірохети і збудником венеричного сифілісу.1 Його природний перебіг має три стадії: первинний, вторинний і третинний або пізній сифіліс з тривалими латентними або неактивними періодами захворювання.2 Первинна інфекція сифілісу визначається наявністю симптому шанкра на місці щеплення. Реакція антитіл до бактерії T.pallidum можна виявити протягом 4-7 днів після появи симптому шанкра і залишається виявленим до тих пір, поки пацієнт не отримає адекватне лікування.

 

1. ПРИНЦИП

 

Швидкий-тест на ВІЛ – це хроматографічний імуноаналіз з боковою проточною хроматографією, заснований на багатошаровому принципі подвійного антигена. Мембрана покрита рекомбінантними антигенами ВІЛ на області тестової лінії смужки. Коли зразок наноситься на один кінець мембрани, він реагує з кон’югатом золота, покритим рекомбінантним антигеном ВІЛ, у тесті. Потім суміш мігрує хроматографічним шляхом капілярної дії та реагує з рекомбінантними антигенами ВІЛ на мембрані в області тестової лінії. Якщо сироватка або плазма містять антитіла до ВІЛ-1 або ВІЛ-2, в області тестової лінії з’явиться кольорова лінія, що показує позитивний результат. Відсутність кольорової тестової лінії вказує на те, що сироватка або плазма не містять антитіл проти ВІЛ, що показує негативний результат. Кольорова лінія завжди буде з'являтися в області контрольної лінії, що служить процедурним контролем. Це вказує на належний обсяг доданого зразку, і що відбулося всмоктування мембрани. Швидкий тест на HBsAg – це імуноаналіз, посилений колоїдним золотом, для визначення поверхневого антигену HBV (HBsAg) у цільній крові, сироватці або плазмі людини. Мишачі антитіла до HBsAg іммобілізовані в досліджуваній області на нітроцелюлозній мембрані. Під час аналізу зразку дають реагувати з забарвленим кон'югатом (кон'югат антитіло-колоїдне золото); суміш потім хроматографічно мігрує на мембрані шляхом капілярної дії. HBsAg-позитивний зразок дає чітку кольорову смугу в тестовій області, утворена специфічним кон'югатним комплексом антитілом-HBsAg. Відсутність цієї кольорової смуги в тестовій області свідчить про негативний результат. У контрольній області завжди з’являється кольорова смуга, яка слугує процедурним контролем незалежно від результату тесту.

Швидкий тест на HCV – це імуноаналіз бічної проточної хроматографії, заснований на принципі техніки подвійного багатошарового антигену. Тест-смужка складається з: 1) кон'югату бордового кольору, що містить антигени HCV, кон'юговані з колоїдним золотом (кон'югати HCV Ag) і кон'югати IgG-золота кролика, 2) смужка нітроцелюлозної мембрани, що містить тестову смугу (смуга Т) і контрольну смугу (C смуга). Смуга Т попередньо покрита некон’югованими антигенами HCV, а смуга С попередньо покрита козячим антикролячим IgG. Коли достатній об’єм досліджуваного зразка подається в прокладку смужки, зразок мігрує за рахунок капілярної дії поперек досліджуваного зразка видається в прокладку для зразка смужки, зразок мігрує шляхом капілярної дії через смужку. Антитіла: IgG, IgM або IgA до HCV, якщо вони присутні у зразку, зв’язуються з кон’югатами HCV Ag. Імунокомплекс потім захоплюється на мембрані попередньо покритими антигенами HCV, утворюючи T-смугу бордового кольору, що вказує на позитивний результат тесту на HCV Ab. Відсутність смуги Т свідчить про негативний результат. Тест містить внутрішній контроль (смуга С), який має демонструвати бордову смугу імунокомплексу козячого антикролячого IgG/кролячого IgG-золота кон’югату, незалежно від наявності будь-якого антитіла до HCV. В іншому випадку результат тесту є недійсним, і зразок необхідно повторно перевірити за допомогою іншого пристрою. Швидкий тесткасета на виявлення сифілісу (цільна кров/сироватка/плазма) — це імуноаналіз бічного потоку, заснований на принципі подвійного багатошарового антигену. У цьому тесті рекомбінантний антиген сифілісу іммобілізується в області тестової лінії смужки в тест-пристрої. Після того, як зразок додається в лунку для зразка пристрою, він реагує з частинками, покритими рекомбінантним антигеном сифілісу в тесті. Ця суміш мігрує хроматографічно вздовж довжини тест-смужки і взаємодіє з іммобілізованими антигенами сифілісу. Якщо зразок містить антитіла до сифілісу, в області тестової лінії з’явиться кольорова лінія, яка вказує на позитивний результат. Якщо зразок не містить антитіл до сифілісу, кольорова лінія в цій області не з’явиться, що вказує на негативний результат. Щоб служити процедурним контролем, кольорова лінія завжди буде з’являтися в області контрольної лінії, що вказує на те, що було додано належний об’єм зразка та відбулося всмоктування мембрани.

1. МАТЕРІАЛИ,ЯКІ ПОСТАЧАЮТЬСЯ З НАБОРОМ

• Тест касета
• Піпетка-крапельниця
• Осушувач
• Буфер
• Пакет – вкладиш

 

1. НЕОБХІДНІ МАТЕРІАЛИ,АЛЕ НЕ НАДАНІ З НАБОРОМ

 

• Ланцет
• Піпетка
• Гепаринізовані капілярні трубки та гумова груша

1. ЗБЕРІГАННЯ ТА СТАБІЛЬНІСТЬ

Набір можна зберігати при кімнатній температурі або в холодильнику (2-30°C). Тестовий пристрій стабільний до закінчення терміну придатності, який надрукований герметичній упаковці. Випробувальний пристрій повинен залишатися в герметичному пакеті до використання. НЕ ЗАМОРОЖУЙТЕ. Не використовуйте після закінчення терміну придатності.

 

1. ЗАСТЕРЕЖЕННЯ ТА ЗАПОБІЖНІ ЗАХОДИ

 

• Тільки для професійної діагностики In Vitro. Не використовувати після закінчення терміну придатності.
• Попередження: реагенти в цьому наборі містять азид натрію, який може реагувати зі свинцевими або мідними трубами, утворюючи потенційно вибухонебезпечні металазиди. При введенні таких реагентів завжди промивайте великою кількістю води, щоб запобігти накопиченню азиду.
• Не використовуйте його, якщо тюбик/мішечок пошкоджений або зламаний.
• Тест призначений лише для одноразового використання. Ні за яких обставин не використовуйте повторно.
• Поводьтеся з усіма зразками так, ніби вони містять інфекційні агенти. Дотримуйтесь встановлених запобіжних заходів щодо мікробіологічної небезпеки шляхом аутестестування та дотримуйтесь стандартних процедур для належної утилізації зразків.
• Одягайте захисний одяг, такий як лабораторні халати, одноразові рукавички та засоби захисту очей під час аналізу зразків.
• Вологість і температура можуть негативно вплинути на результати.